大鼠白介素2(R IL-2)elisa試劑盒
1976年Morgan等發現小鼠脾細胞培養上清中含有一種刺激胸腺細胞生長的因子,由于這種因子能促進和維持T細胞長期培養, 稱為T細胞生長因子 (T cell growth factor, TCGF),1979年統一命名為白細胞介素2(interleukin 2,IL-2)。
1. IL-2的產生 IL-2主要由T細胞或T細胞系產生。
(1)CD4陽性或CD8陽性T細胞:有絲分裂原刺激CD4陽性或CD8陽性T細胞亞群均可產生IL-2同種異體抗原主要刺激 CD4陽性T細胞分泌IL-2。PBMC、脾臟、**結和扁桃腺中的T細胞受到刺激后都能產生IL-2。在小鼠Th細胞中,只有Th1亞群可產生IL-2。
(2)T細胞腫瘤細胞系或白血病細胞系: 人和動物某些T細胞白血病細胞系或腫瘤細胞在有絲分裂原、鈣離子載體(如 A23187) 或PMA刺激下可產生高水平的IL-2。如長臂猿T細胞系MLA144可自發產生IL-2,小鼠胸腺瘤細胞系EL-4和人Jurkat細胞靜止狀態不合成和分泌IL-2,刺激后可分泌高水平的IL-2。
(3)T**細胞雜交瘤: T**細胞雜交瘤123,FS6-14.13, HT-24A等在ConA刺激下產生IL-2。
(4)應用基因工程技術制備: 1983年Taniguchi等從ConA刺激的Jurkat白血病T細胞中克隆成功IL-2cDNA,并在大腸桿菌中得到高水平的表達。目前應用基因工程技術所制備和純化的IL-2已用于臨床**某些腫瘤和其它**。
2. IL-2的分子結構和基因 人IL-2含有133氨基酸殘基,分子量為15.5kDa。天然IL-2在N端含有糖基,但糖基對IL-2的生物學活性無明顯影響,等電點在6.6~8.2。 IL-2分子含有3個半胱氨酸,分別位于第58、105和125位氨基酸,其中58位與105位半胱氨酸之間所形成的鏈內二硫鍵對于保持IL-2生物學活性起重要作用。在IL-2基因產物的提純和復性過程中,如二硫鍵配錯或分子間形成二硫鍵都會降低IL-2的活性。現已有應用點突變, 將第125號位半胱氨酸突變為亮氨酸或絲氨基,使只能形成一種二硫鍵,保證了在IL-2復性過程的活性。還有報道用蛋白工程技術生產新型rIL-2,將IL-2分子第125位半胱氨酸改為丙氨酸, 改構后IL-2比活性比天然IL-2明顯增加。人IL-2基因定位于第4號染色體,長約5kb,由4個外顯子和3個內含子組成。人和小鼠IL-2基因DNA序列有63%同源性。
本試劑盒采用雙抗體夾心法。抗人IL-2單抗包被于酶標板上,標本和標準品中的IL-2會與單抗結合,加入生物素化的抗人IL-2抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素,生物素與親和素特異性結合;抗人IL-2抗體與結合在單抗上的人IL-2結合而形成**復合物,若反應孔中有IL-2,會有顯色反應。在450 nm處測OD值,IL-2濃度與OD450值之間呈正比,可通過繪制標準曲線求出標本中IL-2濃度。
本試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿、細胞培養上清液或組織勻漿上清液中IL-2濃度,供科研使用。
試劑盒內容物:
產品名稱
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規格
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1a標準品
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2支(凍干)
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1b標準品稀釋液
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1瓶
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2a濃縮生物素化抗體
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1支
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2b生物素化抗體稀釋液
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1瓶
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3a濃縮酶結合物
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1支
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3b酶結合物稀釋液
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1瓶
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4濃縮洗滌液20×
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1瓶
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顯色液
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1瓶
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終止液
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1瓶
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抗體包被板條
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8*12
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封板膠紙
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3張
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說明書
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1份
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保存條件:
4℃保存,6個月有效。
注意事項:
1. 短期內使用可將試劑盒保存在2-8℃,如長時間請于-20℃保存。
2. 濃縮生物素化抗體(2a),濃縮酶結合物(3a)裝量極少,運輸中可能會使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請用手甩幾下或離心處理,以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,加熱使結晶完全溶解后再使用。
4. 不建議重復使用標準品。
5. 充分混勻對反應結果尤其重要,*好使用微量振蕩器,也可在反應過程中手工混勻。
6. 在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔或三復孔。
7. 為了您的**和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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