1.將透析管剪成適當(dāng)長度(10-20cm)的小段,即成透析袋。
2.在大體積的2%(m/v)碳酸氫鈉和1mmol/LEDTA(PH=8)中將透析袋煮沸10min。
3.將透析袋用蒸餾水徹底漂洗。
4.將透析袋置1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min。
5.透析袋冷卻后存放于4度,應(yīng)確保透析袋始終浸沒在液體中。
注:從此步起用透析袋時一定要戴手套操作。
6.在使用之前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗。
注:也可以將透析袋放在廣口瓶中充滿水,松動瓶蓋,于20psi(1.40kg/cm2)高壓**10min,代替第四步用1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min的操作。
使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中,若長時間不用,可加少量NaN2,以防長菌。洗凈涼干的透析袋彎折時易裂口,用時必須仔細檢查,不漏時方可重復(fù)使用。
新透析袋如不作如上的特殊處理,則可用沸水煮五至十分鐘,再用蒸餾水洗凈,即可使用。
美國美國光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的透析袋大部分是預(yù)處理過的,即用型,使用前只需用蒸餾水沖洗即可使用,spectra/por7系列和生物技術(shù)級的透析袋基本不含硫化物和重金屬離子。
使用時,一端用橡皮筋或線繩扎緊,也可以使用特制的透析袋夾夾緊,由另一端灌滿水,用手指稍加壓,檢查不漏,方可裝入待透析液,通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,透析的小分子量較大時,袋外的水和緩沖液過量進入袋內(nèi)將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析過夜時,體積增加50%是正常的。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析,可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。
檢查透析效果的方法是:用1% BaCl2檢查(NH4)2SO4,用1% AgNO3檢查NaCl、KCl等。
為了提高透析效率,還可以使用各種透析裝置。使用者也可以自行設(shè)計與制作各種簡易的透析裝置。美國美國光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的各種型號的透析設(shè)備,由于使用對流透析的原理,使透析速度和效率大大提高。
選用透析袋需要知道目的物質(zhì)的分子量,每次處理的樣品量,同一批次的平行試驗,是否需要保持目的物質(zhì)的活性來選擇,目前國內(nèi)使用的透析袋主要由上海歐韋達儀器科技有限公司提供,該公司能提供專業(yè)的技術(shù)指導(dǎo)。