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技術(shù)文章

弗氏完全佐劑介紹

 弗氏完全佐劑是一種油包水的乳濁液,能夠非常有效的誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的抗體。弗氏完全佐劑含結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁成分,可以加強(qiáng)對(duì)抗原的抗體反應(yīng)。佐劑活性來自于油滴中**原的持續(xù)釋放,并刺激局部**反應(yīng)。簡(jiǎn)單的說,這個(gè)注射入哺乳動(dòng)物皮下之后,會(huì)產(chǎn)生炎癥和疼痛。

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弗氏佐劑是現(xiàn)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中*常用的佐劑,分為不完全弗氏佐劑和完全弗氏佐劑。不完全弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成,組分比為1~5:1,可根據(jù)需要而定,通常為2:1。不完全佐劑中加卡介苗(*終濃度為3~20mg/ml)或死的結(jié)核分枝桿菌,即為完全弗氏佐劑(FCA)。 一般**注射時(shí)用1/2體積FCA加上1/2體積的抗原進(jìn)行乳化,**次或第三次注射時(shí)用不完全佐劑或不用佐劑。如不加佐劑,則抗原量增大10-20倍。[1] 
配制方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi),用超聲波使之混勻,高壓**,置5℃下保存?zhèn)溆谩?/div>
在**動(dòng)物前,先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合,佐劑和抗原體積比一般為1:1,制備成 "油包水"乳狀液。因?yàn)楹琒DS很易促使其乳化成油包水抗原乳化復(fù)合物,注射入動(dòng)物體內(nèi)時(shí)一定要保持乳化狀態(tài)??乖昧恳暱乖肿恿坎煌?*原性及**動(dòng)物不同而有一定差異,無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)和固定模式。一般是每兔(約2kg重)或每羊(約20kg重)第1次注射抗原2mg,以后逐次增加抗原量,*多每次不超過3mg。佐劑與抗原乳化可按如下方法進(jìn)行:
(1) 研磨法:先將佐劑加熱并取適量放入無菌的玻璃研缽內(nèi),待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液,邊滴邊按同一方向研磨,滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后,繼續(xù)研磨一段時(shí)間,使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原,缺點(diǎn)是研缽壁上粘附大量乳劑,抗原損失較大。
(2) 注射器混合法:將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個(gè)注射器內(nèi),兩注射器之間以一細(xì)膠管相連,注意排凈空氣,然后交替推動(dòng)針管,直至形成粘稠的乳劑為止。本法優(yōu)點(diǎn)是容易做到無菌操作,抗原損失少,適用于制備少量的抗原乳劑。但同時(shí)難以乳化完全,個(gè)別抗原,用塑料注射器根本推不動(dòng),而用玻璃注射器又有滲漏。制備好的乳化劑經(jīng)鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中,若保持完整不分散,成滴狀浮于水面,即乳化完全,為合格的油包水劑。

 

(3) 超聲:實(shí)驗(yàn)室條件好點(diǎn)的,比如說有超聲破碎儀的,一定要控制超聲頻率和時(shí)間,超聲容易激發(fā)一些自由基,對(duì)抗原有未知損害。乳化方法要根據(jù)抗原和需要而定。

 

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其他**佐劑的物質(zhì)

弗氏佐劑也屬于**佐劑。其他**佐劑的物質(zhì)有:①微生物及其產(chǎn)物,常用的微生物有分枝桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌以及處左蘭氏陰性桿菌的提取物脂多糖,自分枝桿菌的提取物質(zhì)胞壁酰二肽等。②多聚核苷酸,如多聚肌苷酸:胞苷酸(poly1:C),多聚腺苷酸(poly1:A:μ)等;。③無機(jī)物,如明礬及氫化鋁等。

 

佐劑的作用機(jī)制尚不完全清楚:①它可能增加抗原的表面面積,易為巨噬細(xì)胞所吞噬;②延長(zhǎng)抗原在體內(nèi)的存留期,增加與**細(xì)胞接觸的機(jī)遇;③誘發(fā)抗原注射部位及其局部**結(jié)的炎癥反應(yīng),有利于刺激**細(xì)胞的增殖作用。