組織單細胞懸液的制備方法
注:A.組織勻漿液需現用現配,配制方法為:20%標準胎牛血清(產品編號:TBD31HB)
與 80%F 液(產品編號:F2013TBD)混勻,備用。
B.本試劑盒中不包含膠原酶,若采用酶消化法制備單細胞懸液,請用戶根據各實驗室要求另購不同類型膠原酶。
1. 剪碎法:
(1) 將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,加入 5ml
組織勻漿液。
(2) 用吸管吸取組織勻漿,用 200 目不銹鋼濾網(另購)過濾到離心管內。
(3) 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘,棄上清。
(4) 用含 80%標準胎牛血清(產品編號:TBD31HB)的樣本稀釋液(產品編號:2010C1119),懸浮沉淀成細胞濃度為 2×108–1×109/ml 的單細胞懸液備用。
2.勻漿器法:
(1) 用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內,加入 2ml 組織勻漿液;緩慢轉動研棒,研磨至勻漿。
(2) 用 5ml 組織勻漿液沖洗研器;收集細胞懸液,經 200 目不銹鋼濾網(另購)過濾到離心管內。
(3) 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘,棄上清。
(4) 用含 80% 標準胎牛血清(產品編號: TBD31HB )的樣本稀釋液(產品編號:2010C1119),懸浮沉淀成細胞濃度為 2×108–1×109/ml 的單細胞懸液備用。
3.酶消化法:
(1) 用 F 液(產品編號:F2013TBD)將膠原酶稀釋,終濃度為 400U/ml,至于冰浴備用。(2) 取一適當大小培養皿進行操作:用鑷子 夾碎動物脾臟,加入稀釋后的膠原酶,37℃
消化 20 分鐘。
(3) 以 200 目不銹鋼濾網(另購)過濾到離心管內。
(4) 沉淀以 450-500g 離心 15 分鐘,棄上清。
(5) 用含 80% 標準胎牛血清(產品編號: TBD31HB )的樣本稀釋液(產品編號:2010C1119),懸浮沉淀成細胞濃度 為 2×108–1×109/ml 的單細胞懸液備用。